11684817910-1 kit (50 tests)

本試劑盒基于標記DNA鏈斷裂處的方法（TUNEL 技術），及后續的免疫組織化學檢
測，檢測精確、快速、簡便，且無放射性操作危害的特點，在單細胞水平上檢測和定量細胞樣本和組織樣本中的凋亡細胞。通過光學顯微鏡分析最終結果。
應用于多種不同的分析實驗：
. 在基礎研究和常規病理學研究中，檢測福爾馬林固定或冰凍組織切片的單個細胞凋亡。
. 在癌癥和臨床腫瘤學研究中，檢測惡性腫瘤細胞對誘導細胞凋亡的藥物的敏感度。
. 通過雙染法對異質種群中出現凋亡的細胞進行分類。

儲層溫度：-15至-25℃下保存試劑盒  

 試劑盒特性 及應用優勢 

靈敏：單細胞水平上檢測凋亡早期的細胞

特異：相對于壞死細胞，優先標記凋亡細胞 

快速：實驗流程短（2-3h） 

簡便：提供穩定的，優化的試劑 ，無需稀釋步驟 

靈活：可用于固定的細胞和組織樣本，允許細胞樣本富集，儲存和運輸

 檢測原理 

細胞凋亡過程中，基因組DNA斷裂，生成低分子量的DNA雙鏈片段（單核小體和寡聚核小體）和高分子量含單鏈斷裂缺口的DNA片段。 

通過酶標記反應，可以用修飾過的核苷酸標記這些DNA鏈斷裂和缺口處的3'-OH末端，進行后續的識別。

檢測特異性 

TUNEL反應優先標記凋亡細胞中產生的DNA鏈斷裂。該檢測反應可區分凋亡細胞和壞死細

胞，也區分于由于細胞抑制性藥物或放射引起的DNA鏈斷裂[3,4]。 

檢測干擾 

假陰性結果：在某些細胞凋亡形式下，未出現明顯的DNA斷裂[37]?？臻g位阻如細胞外基質

會干擾TdT與DNA鏈斷裂處的結合。這兩種情況都會導致假陰性結果。 

假陽性結果：細胞壞死后期可能出現DNA片段化[4,38]。增殖和代謝非?；钴S的細胞中也會

出現DNA鏈斷裂情況。這兩種情況都會導致假陽性檢測結果。為確認細胞凋亡，必須非常仔

細地觀察每個細胞的形態變化，凋亡過程中細胞的形態改變有其特征模式。因此，鑒定細胞的

形態在結果模棱兩可的情況下是非常重要的方法。 

2.2 背景資料 

細胞死亡 

細胞死亡有兩種不同的模式，根據死亡細胞的形態，生化以及分子變化，可區分為細胞凋亡和

細胞壞死。 

細胞凋亡或稱程序性細胞死亡是真核細胞死亡最常見形式，這是細胞維持自身平衡的一種生理

學自殺機制。細胞凋亡是正常組織物質循環中的一種自然過程[8,9]。一般而言，凋亡細胞的細

胞核和細胞質會表現出典型的結構變化特征，包括質膜皺縮和核裂解。在鈣依賴性的內源性核

酸內切酶激化作用后，染色質和DNA破壞斷裂形成以寡聚核小體為單位的DNA片段，這一

過程是核裂解的一個部分[10,11]。然而，有極少數例外情況顯示在存在形態學特征的凋亡細胞

中并無寡聚核小體DNA的斷裂生成 [37]。 

細胞凋亡 

凋亡發生在許多生理學過程中，包括免疫系統的成熟和效應機理[12,13]，組織、器官和四肢的

胚胎發育過程[14]，神經系統發育[15,16]，激素依賴性組織重塑等[17]。凋亡的不當調控可能

在眾多病理學情況中扮演著重要的角色，如貧血，中風，心臟病，癌癥，AIDS，自身免疫疾

病，肝中毒以及中樞中央神經系統退行性疾病等[18-20]。 

在腫瘤學中，對于細胞凋亡行為的廣泛關注在于觀察各種抗癌藥物、輻射以及高熱觸發的細胞

凋亡過程，以及腫瘤細胞對凋亡作出的響應究竟受到了哪幾種腫瘤相關基因的調控，這些可能

對癌癥治療具有很大的意義[21]。 

凋亡識別 

已有幾種方法被用于識別凋亡細胞[22-24]。內生性的核酸降解被認為是凋亡過程中的關鍵生化

事件，其導致細胞核DNA裂解成寡聚核小體大小的片段。因而，這個過程被普遍的用來檢測

凋亡，凋亡細胞能通過瓊脂糖凝膠電泳檢測出的典型“DNA 梯帶”圖譜。然而，電泳方法無

法提供有關單個細胞凋亡的信息，也無法將細胞的凋亡同組織原位和細胞分化聯系起來。 

這個問題可以用通過酶法原位標記凋亡引起的DNA斷裂鏈得到解決。DNA聚合酶以及脫氧

核糖核苷酸原位轉移酶（TdT）均被用于將標記的核苷酸插入到DNA鏈斷裂處，這個過程可

以在細胞和組織原位進行。使用TdT的加尾標記技術，也叫做ISEL（原未末端標記）[5,35]或

TUNEL技術（TdT-調控的dUTP缺口末端標記）[1,6,31,33]，相對于通過DNA聚合酶進行的

原位缺口轉移（ISNT）技術有幾大優勢： 

. 相對于ISNT，TUNEL標記凋亡細胞的強度更大，具有更高的靈敏度[2-4]。 

. 相對于ISNT，TUNEL技術的核苷酸標記動力學更加迅速[2-4]。 

. 和壞死細胞相比，TUNEL優先標記凋亡細胞，因而可區分凋亡細胞和壞死細胞[3-4]。